ELISA 的优点和缺点对比

强强

    ELISA是一种广泛用于测定液体样品中蛋白质、抗体或激素的免疫分析技术。酶联免疫吸附试验（ELISA）的标准程序通常是将蛋白质、抗体或激素（即抗原）直接或用捕获抗体（captureAb）固定在固相载体上，然后加入一抗（Ab），形成抗原抗体复合物。如果该抗体已经酶标记，则可直接用于测定抗原的量。若没有，则可使用另一种酶标记的二抗来测定抗原的量。测定抗原量的方法是加入酶的底物，作用后产生的颜色深度与样品中抗原的量成正比。基于此原理，可计算出样品中抗原的总量或浓度。

    常用ELISA方法的优缺点

    常用的ELISA技术主要有四种：直接法、间接法、双抗体夹心法和竞争法。下文将逐一解释这些方法的概念、优缺点。

    直接法

    将抗原直接固定在固相载体上，加入酶标记的一抗，即可测定抗原的总量，这个一抗的特异性非常重要。

    优点：操作简单，无需使用二抗，可避免交叉反应。

    缺点：实验中的一抗必须用酶标记，但并不是每种抗体都适合标记，而且成本相对较高。

    间接法

    该测定方法与直接法类似，不同之处在于一抗未经酶标记，而是使用酶标记的二抗来识别一抗，从而测定抗原的量。

    优点：二抗可以增强信号，并且针对不同的检测方法有多种选择。未经酶标记的一抗可保留最高的免疫反应性。

    缺点：发生交互反应的概率较高。

    夹心ELISA

    待检测的抗原被包被在两种抗体之间，其中一种抗体将抗原固定在固相载体上，即捕获抗体。另一种抗体是检测抗体。这种抗体可以用酶标记，直接测定抗原的量；也可以不标记，然后用酶标记的二抗测定抗原的量。必须仔细选择这两种抗体，以避免相互作用或竞争相同的抗原结合位点。

    优点：灵敏度高、特异性高、无需事先纯化抗原。

    缺点：抗原必须具有两个以上的抗体结合位点。

    竞争性ELISA

    样品中的抗原（游离抗原）与纯化固定在固相载体上的抗原（固定抗原）竞争同一种抗体。样品中游离抗原较多时，能结合的抗体较多，而固定抗原则只有较少的抗体能与其结合，反之亦然。经过清洗步骤后，游离抗原抗体复合物被洗去，只留下固定抗原抗体复合物。将结果与仅有固定抗原的对照结果进行比较，根据颜色差异即可计算出样品中的抗原。

    优点：可以适用于比较不纯的样品，数据重现性很高。

    缺点：总体敏感性和特异性较差。

    总而言之，ELISA技术因其操作简便、灵敏度高、特异性强等优点，已成为生物医学研究和临床诊断中不可或缺的工具。四种主要的ELISA方法，即直接法、间接法、双抗体夹心法和竞争法，各有其优缺点，适用于不同的实验目的和抗原特性。研究人员需要根据具体的实验需求，例如抗原的纯度、可获得的抗体类型以及所需的灵敏度和特异性，选择最合适的ELISA方法。对不同ELISA方法的理解和合理选择，将有助于获得更准确可靠的实验结果，推动相关领域的研究进展。原文地址：https://www.mlbio.cn/article-3340.html