MCE干货分享：一抗二抗选择小技巧，不同实验对抗体的要求

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灵敏度高 | 特异性强 | 亲和力强 | 批次稳定性高

抗体 (Antibodies)，又称为免疫球蛋白 (Immunoglobulin, Ig): 由 B 细胞增殖分化而来的浆细胞合成并分泌，能够特异性识别与结合抗原。

抗体选择技巧

一抗选择三要素：

1.目的蛋白：确认研究的目的蛋白名称 (核对 Gene ID)；

2.反应种属：抗体的反应种属 (Reactivity) 要包含待测样本的种属；

3.应用：确认抗体说明书上的应用 (Application) 包含待做的实验。

二抗选择要点：

1.种属来源：根据一抗种属来源进行选择；如一抗宿主是小鼠来源，则二抗选择抗小鼠的即可 (宿主来源于羊、兔等均可);

2.标记物的选择：根据实验类型不同，来选择二抗的偶联标记。

不同实验对抗体有什么要求？

WB

WB 实验中，蛋白质在加热条件下会发生变性。因此，WB 所使用的抗体需要能够特异性地识别变性后蛋白质的线性序列结构。为了提高抗体的特异性，通常使用针对高特异性序列的合成多肽作为抗原进行制备。

IP/ChIP

IP 实验需要抗体能够识别抗原的天然构象，以便结合并沉淀抗原。因此，制备 IP 抗体时，最佳选择是使用纯化的天然蛋白或重组蛋白作为抗原来源。

ChIP 和 IP 原理上相似，但如果抗体识别的表位恰好是蛋白质与 DNA 结合的部位可能会干扰结合，导至实验结果偏差或失败。

IF/IHC

IF/IHC 实验中，固定液里的化学物质能够穿透细胞膜，与细胞内的蛋白质、核酸等生物大分子发生反应，导至蛋白质变性凝固。这种变性凝固一定程度改变了蛋白质的天然构象。

但与 WB 变性不同，WB 中的加热变性是通过高温使蛋白质完全变性，而在 IF 和 IHC 中变性程度较轻，蛋白质仍然保持了一定的空间构象，这一特性允许一些依赖于蛋白质天然构象的抗体与之结合。

因此，在做 IF/IHC 实验时，可以选择纯化的重组蛋白得到的抗体，也可以是人工合成多肽得到的抗体 (多肽需要在蛋白质结构的表面)。

FC

在 FC 实验中，分为活细胞流式分析和经过固定处理的流式分析两种类型，它们对抗体的要求有所不同。

对于活细胞流式分析，最好使用针对天然蛋白或重组蛋白的抗体。这些抗体能够识别活细胞表面或细胞内的抗原，为活细胞提供准确和可靠的信息。

对于经过固定处理的流式分析，要求和 IF/IHC 实验中所用的抗体一致。

抗体选择 Q&A

Q: 我的抗体做 WB 非常好，可以做 IF, IHC 等其他任何实验吗？

A: 不一定，该抗体可能只针对蛋白质的线性表位设计的，且用来做抗原的多肽恰好被包埋在蛋白质 的内部，可能只识别 WB 中线性的部分。

Q: 做 ChIP 的抗体是否可以用来做 WB 抗体？

A: 不一定，一般情况下多数能做 ChIP 的抗体都可以做 WB。但是如果 ChIP 的抗体识别的是构象表位

(比如是由两个实际靠在一起但变为线性结构之后相隔很远的两端序列)，而不是线性表位，这种 ChIP抗体做不了 WB。同理适用于 IP 的抗体不一定适用于 WB；适用于 IHC-P (抗原修复) 的不一定适用于IHC-F (不修复)。

Q: 抗体说明书上面没有写该抗体能够用于某项实验怎么办？

A: 一般而言，是没有进行验证或验证效果不佳，不建议直接用，可少量尝试。

MCE 产品亮点

MCE 提供 6,000+ 精品一抗和多种优质二抗，包含自噬、凋亡、免疫、细胞周期等多个信号通路，全面覆盖热门靶点，助力您的科学研究！

高特异性与高亲和力：重组兔单抗为主，有效减少非特异性结合；

广泛适用性：适用于多种实验方法，如 WB、IF/ICC、IHC、FC、ELISA 等；

严格质控：每一批抗体都经过严格的质量检测，确保品质稳定可靠。

实验验证

内源性免疫学验证：

小分子抗体 ELISA 验证：

客户验证

1.SIRT1 Antibody (HY-P80319)

J Inflamm Res. 2024 Mar 28:17:1971-1981. 样本种属: Human, Mouse; 应用 WB, IF

2.RUNX2 Antibody (HY-P80445) +CaMKII alpha Antibody (HY-P80316)

Appl Mater Today. 2024 Feb, 36, 102026. 样本种属: Human; 应用: IF

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